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歡迎來到肽谷生物-專業多肽定制。

服務熱線:+86-(0)-18115476705

原核表達系統

      原核表達系統是通過原核生物來獲得外源蛋白的體系,也是最常用的蛋白表達體系之一,相比哺乳動物蛋白表達系統,其成本更低,操作也更簡單。肽谷生物可以提供的原核表達系統服務包括:可溶性蛋白表達服務、內毒素檢測服務等。

  • 可溶性蛋白表達服務

          肽谷生物可溶性蛋白表達采用大腸桿菌(E.coli)表達系統進行重組蛋白生產,您只需要提供目標蛋白序列或其對應的基因序列,肽谷生物會按照合同約定的量及純度進行交付。

    服務流程與項目

    內容

    周期

    1.基因合成

    密碼子優化與基因合成

    1-2周

    2.載體構建

    克隆至表達載體(質粒)

    質粒測序

             

    大量質粒制備

    2-3周

    3.表達評估

    轉化適合菌株

    小量發酵培養

    SDS-PAGE檢測
    評估蛋白表達情況

    1-2周

    4.蛋白表達及純化

    根據表達評估進行發酵

    蛋白純化

    SDS-PAGE檢測,UV分析

    2-3周

    交付內容:

    基因構建測序報告;


    表達評估及可行性報告;


    純化蛋白;


    SDS-PAGE報告及實驗報告。


  • 內毒素檢測

          肽谷生物提供內毒素檢測服務。內毒素(endoroxin)是革蘭氏陰性細菌(如大腸桿菌E.coli)細胞壁中的一種成分,叫做脂多糖(LPS)。大腸桿菌在重組蛋白表達過程中,會產生大量內毒素。內毒素是一種熱源,會導致生物體炎癥發熱反應,所以使用重組蛋白于動物實驗時,內毒素的檢測就很有必要。

    常用實驗對內毒素的要求如下表:

    重組蛋白應用實驗

    對內毒素的要求

    體外酶活實驗

    無影響

    蛋白抗原、制備抗原

    無影響

    體外細胞分化培養

    要求低內毒素<1EU/ug

    其他動物體內實驗

    要求低內毒素

    內毒素檢測方法:

        內毒素的檢測方法有半定量的凝膠法檢測和絕對定量的顯色法。目前國際上最精確的是基于鱟試劑的顯色法和凝膠法。

    內毒素的一般水平與藥用標準:

    應用領域

    內毒素一般水平與標準

    大腸桿菌

    100萬 EU/ml

    自來水

    10-100 EU/ml

    生物制藥

    <0.01 EU/ml

    髓鞘內注射藥

    0.2 EU/kg

    非髓鞘內注射藥

    <5 EU/kg

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